高效液相色譜,是液體樣本被壓力注入色譜柱,通過分析物與固定相相互作用不同,不同物質(zhì)按照順序離開色譜柱,通過檢測器得到不同信號,具有高分離度,高重復(fù)性的優(yōu)勢。液相色譜在藥物研發(fā),環(huán)境分析,食品分析,臨床醫(yī)學等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用,可完成純度測定,復(fù)雜生物樣品中分析物含量測定等。方法學開發(fā)的目的就是在熱力學和動力學之間找到分析物的平衡點,以期來更好對樣品中分析組分進行分離,相互定量不產(chǎn)生干擾。
①含真實樣本的方法開發(fā):報告提供方法檢測下限,線性范圍(根據(jù)真實樣本調(diào)整),樣品檢測結(jié)果,詳細色譜條件,不做多基質(zhì)條件的摸索;②不含真實樣本的方法開發(fā):已經(jīng)完成方法開發(fā),有成熟的方法-樣本前處理-上機檢測報告提供方法檢測下限,上下限的倍數(shù)關(guān)系,詳細色譜條件,不做基質(zhì)條件的摸索。
標準品測量配制→標品預(yù)試→樣品上機預(yù)試→調(diào)整儀器參數(shù)→驗證線性倍數(shù)→驗證基質(zhì)干擾→完成方法開發(fā)→樣本前處理→上機檢測
1、細胞樣本
①細胞量1×107個,收集細胞沉淀,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融。
②收集時,用預(yù)冷PBS緩沖液清洗三次,去除培養(yǎng)基成分,然后離心去除上清保存。
③如需要進行細胞計數(shù),則需送樣前進行。
2、全血樣本
①樣本量200 μL,EDTA、EDTA-K2或肝素鈉抗凝,4℃保存,冰袋運輸,避免劇烈振蕩和冷凍結(jié)冰。
②由于全血常規(guī)保存期為7天,如需檢測,需要提前至少1周聯(lián)系實驗室確認周期情況,以便溝通協(xié)調(diào)安排檢測。
3、血清、血漿樣本
①樣本量100 μL,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融及溶血。
4、尿液樣本
①樣本量200 μL,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融及帶入糞便殘渣。
5、動物組織樣本
①樣本量300 mg,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融。
②收集時,用預(yù)冷PBS緩沖液沖洗表面血液,并用濾紙吸干多余水分,避免凍存時結(jié)冰。
③固定液浸泡過的樣本無法進行檢測。
6、植物組織樣本
①樣本量500 mg,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融。
②收集時,用預(yù)冷PBS緩沖液沖洗表面泥沙,并用濾紙吸干多余水分,避免凍存時結(jié)冰。
③固定液浸泡過的樣本無法進行檢測。