膜片鉗技術(shù)(patch clamp recording technique)。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。它和基因克隆技術(shù)(gene cloning)并架齊驅(qū),給生命科學(xué)研究帶來了巨大的前進(jìn)動力。
1. 微電極的制備
2. 細(xì)胞標(biāo)本的制備
3. 高阻封接的的形成
4. 離子單通道電流的記錄或全細(xì)胞記錄
1. 貼壁細(xì)胞:用胰酶將細(xì)胞消化下來,或用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細(xì)胞沉淀,干冰運(yùn)輸。
2. 懸浮細(xì)胞:將培養(yǎng)液1000轉(zhuǎn)/分,離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀,干冰運(yùn)輸。
3. 細(xì)胞上清:3000轉(zhuǎn)/分,離心15min取上清,上清立即用于實(shí)驗(yàn),或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。