外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤(pán)狀囊泡。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。
早期的研究認(rèn)為，外泌體執(zhí)行蛋白運(yùn)輸功能，特異靶定受體細(xì)胞，交換蛋白和脂類(lèi)或引發(fā)下游信號(hào)事件。直到2007年，研究人員發(fā)現(xiàn)外泌體也運(yùn)輸核酸，參與細(xì)胞間通訊。總之，其蛋白、RNA和脂肪成分特異，且攜帶了一些重要的信號(hào)分子，有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用，這使得外泌體的市場(chǎng)也在快速擴(kuò)展，并成為熱門(mén)的研究對(duì)象。
外泌體由于攜帶的蛋白質(zhì)不同，而能夠發(fā)揮不同的生物學(xué)功能。目前研究發(fā)現(xiàn)，外泌體內(nèi)含有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA，并且外泌體能夠通過(guò)生物屏障，在細(xì)胞間傳遞功能性核酸分子，從而發(fā)揮各種生物學(xué)功能，故外泌體有望成為一種新型給藥途徑及基因治療載體。外泌體攜帶蛋白質(zhì)包括源細(xì)胞非特異性和源細(xì)胞特異性?xún)深?lèi)蛋白分子。前者可能與外泌體的生物發(fā)生和生物學(xué)作用有關(guān)，主要包括：細(xì)胞溶質(zhì)蛋白、參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白、各種代謝酶、熱休克蛋白和四跨膜蛋白；另一類(lèi)是特殊蛋白質(zhì)，這類(lèi)蛋白質(zhì)只存在于某種特殊的細(xì)胞分泌的外泌體，而這些特定細(xì)胞源的外泌體與其生物學(xué)功能有著密切聯(lián)系。
1. 外泌體的提取
2. 外泌體的分析
1、血清樣本(干冰運(yùn)輸)
將收集好的全血，靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存（-20℃或-80℃）。
2、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)
收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存（-20℃或-80℃）。
3、組織樣本
取組織塊（0.1g～0.2g）最少可到2～5mg在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，準(zhǔn)確稱(chēng)重，放入5ml的勻漿管中。按重量：體積=1：9的比例加入勻漿介質(zhì)或者0.86%的生理鹽水于勻漿管中，冰水浴條件下，用眼科小剪盡快剪碎組織塊，進(jìn)行勻漿。將制備好的勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)2500轉(zhuǎn)/分左右，離心10～15分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定。制備好的勻漿液建議不要凍存，最好當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定，如放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)相關(guān)酶活會(huì)有所下降。
4、細(xì)胞樣本
貼壁細(xì)胞：用胰酶將細(xì)胞消化下來(lái)，或用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來(lái)，將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。
懸浮細(xì)胞：將培養(yǎng)液1000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。
細(xì)胞上清：3000轉(zhuǎn)/分，離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗(yàn)，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。
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