亞硫酸氫鹽處理后測序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是檢測基因甲基化的經(jīng)典方法,其原理為:用亞硫酸氫鈉修飾處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶則不變。BSP(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)克隆測序法,是目前甲基化檢測的金標(biāo)準(zhǔn)。
DNA抽提→亞硫酸氫鹽處理→引物設(shè)計(jì)及擴(kuò)增→挑選克隆測序→數(shù)據(jù)分析
1. 組織、細(xì)胞:-80℃保存,干冰運(yùn)輸;
2. 血液:EDTA抗凝管,4℃運(yùn)輸;
3. DNA:體積≥50μl,濃度≥50 ng/μl,4℃運(yùn)輸。