實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）是一種以PCR反應為基礎的DNA定量技術，通過對目標基因在擴增過程中產(chǎn)生的拷貝數(shù)進行實時的定量，從而達到對目的基因的定性和定量分析?，F(xiàn)有兩種常用的方法對PCR產(chǎn)物進行熒光定量：一種是利用熒光染料與雙鏈DNA結合，通過熒光強度進行熒光定量；另一種是利用攜帶了熒光報告基因的特異性DNA探針對目標基因進行定量。
常用熒光染料有：SYBR GreenⅠ、EvaGreen、LC Green等
Taqman熒光探針作為定量檢測的首選，是一種寡核苷酸，充當DNA復制的起點，熒光基團連接在探針的5'末端，淬滅劑連接在3'末端。PCR擴增時加入引物和探針，探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，探針酶切降解，報告熒光基團與淬滅熒光基團分離，熒光信號被系統(tǒng)檢測接收，每擴增一條DNA鏈伴隨一個熒光分子形成，實時熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物同步進行，實現(xiàn)實時定量的實驗結果。相對于SYBR熒光染料具有序列特異性，直結合到互補區(qū)的強靈敏度。相較于雜交探針，其只需設計一條探針，既方便也能完成定量PCR要求。
獲得游離5，-羥基→合成DNA原料→帶帽（capping）反應→轉化為穩(wěn)定磷酸三酯→重復步驟4
探針引物設計實驗流程：
目的基因查找比對→探針與引物設計→合成
熒光定量QPCR實驗流程：
取材→RNA提取逆轉錄成cDNA→實時熒光定量PCR-(QPCR產(chǎn)物電泳)→數(shù)據(jù)分析
基因名稱和種屬、或已知探針引物序列、或基因ID號
熒光定量QPCR送樣運輸要求：
組織、細胞：-80℃保存，干冰運輸；
血液：EDTA抗凝管，4℃運輸；
RNA樣本：體積≥10 μL，干冰運輸。
