CCK-8是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測試劑。WST-8 [化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽],是一種類似于MTT的化合物,它在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下,被線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產物(formazan)。顏色的深淺與細胞增殖成正比,與細胞毒性成反比。
EdU(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴基團在天然化合物中很少見,能夠在DNA復制時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在合成的DNA分子中,基于Apollo?熒光染料與EdU的特異性反應即可直接并準確地檢測出DNA復制活性,廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復、病毒繁殖等方面的研究,尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及各種藥物的細胞增殖及活力篩選實驗。
1. 接種細胞懸液100μl于96孔板,預先置于37℃,5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱內培養(yǎng);
2. 每孔內加入10μl的CCK-8試劑;
3. 培養(yǎng)板放培養(yǎng)箱內孵育1-4小時;
4. 酶標儀測定450nm波長度吸光值。
1. 細胞培養(yǎng):接種細胞懸液于96孔板中,培養(yǎng)至正常生長階段
2. 藥物處理:根據(jù)實驗需要進行各種藥物處理
3. EdU標記:用細胞培養(yǎng)基按1000:1的比例稀釋EdU溶液 (試劑A),制備適量50μM EdU培養(yǎng)基;
4. 細胞固定
5. Apollo染色
6. 圖像獲取及分析