在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),細(xì)胞發(fā)生凋亡最早期,膜磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。AnnexinV是一種磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一種核酸染料,凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞細(xì)胞膜通透性的增加,PI透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。Annexin V與PI聯(lián)合使用時(shí),PI 則被排除在活細(xì)胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡細(xì)胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞同時(shí)被FITC和PI結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性(Annexin V+/PI+)
收集細(xì)胞上清和沉淀→PBS洗滌細(xì)胞→熒光標(biāo)記細(xì)胞→上機(jī)檢測(cè)