皮膚是人體最大的器官,也是體內(nèi)和外界的屏障,它包含表皮層和真皮層2部分,其中表皮包括基質(zhì)層、棘層、肉芽層、角質(zhì)層;目前燒傷、外科手術(shù)皮膚缺損,慢愈性皮膚病急需新的皮膚替代物,而且皮膚替代物在皮膚病的藥物研究中發(fā)揮重要作用,由于人體真實皮膚模型不可行,動物模型不能針對性代表藥物對人體皮膚的作用,所以體外構(gòu)建3D皮膚模型具有重大意義。
1. 復(fù)蘇細胞時,從超低溫相中取出凍存細胞,迅速將凍存管放入提前預(yù)熱的37℃水浴鍋。
2. LPS 誘導(dǎo)的細胞炎癥模型:首先將LPS稀釋1μg/ml 的工作液,從恒溫培養(yǎng)箱中取出細胞,在顯微鏡下觀察,更換新的培養(yǎng)液并向細胞培養(yǎng)液中加入預(yù)先配置好的濃度為 1μg/ml 的 LPS,放入恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),至合適的時間點,進行后續(xù)試驗。
3. CCK-8檢測細胞生存率、Western 蛋白定量檢測