過(guò)表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞系是將靶DNA克隆到具有某種抗性或選擇基因的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到宿主基因組中，使外源基因在宿主細(xì)胞中長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)。
1. 引物設(shè)計(jì)與目的片段的擴(kuò)增
2. 目的片段與慢病毒載體質(zhì)粒連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，挑取單克隆菌落，提取進(jìn)行檢測(cè)目標(biāo)基因。
3. 慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞，培養(yǎng)48小時(shí)后，收集細(xì)胞上清，測(cè)定病毒滴度。
4. 抗生素篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。
5. qPCR或WB檢測(cè)目的基因的表達(dá)
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