過表達穩(wěn)定細胞系是將靶DNA克隆到具有某種抗性或選擇基因的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細胞并整合到宿主基因組中，使外源基因在宿主細胞中長期穩(wěn)定表達。
1. 引物設(shè)計與目的片段的擴增
2. 目的片段與慢病毒載體質(zhì)粒連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞，挑取單克隆菌落，提取進行檢測目標基因。
3. 慢病毒表達載體轉(zhuǎn)染細胞，培養(yǎng)48小時后，收集細胞上清，測定病毒滴度。
4. 抗生素篩選穩(wěn)定細胞株。
5. qPCR或WB檢測目的基因的表達。
