小鼠主動脈內皮細胞(mice aortic endothelial cells,MAEC)分離自主動脈組織;主動脈是體循環(huán)動脈的主干。由左心室發(fā)出,起始部有主動脈瓣,可依次分為升主動脈,主動脈弓和降主動脈。降主動脈又分為胸主動脈和腹主動脈。接受左心室搏出的血液,并發(fā)出各級分支將血液運輸到全身各組織、器官。當主動脈病變(如主動脈瘤、主動脈瓣狹窄、主動脈破裂等)時可影響全身血液的供應。
1)貼壁細胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。