自噬是細(xì)胞利用溶酶體降解途徑進(jìn)行自我吞食的過(guò)程,是細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)不足等壓力情況下維持生存的主要代謝途徑。自噬主要分為三類,即巨自噬(Macroautophagy)、微自噬(Microautophagy)、分子伴侶介導(dǎo)的自噬(Chaperone-mediated autophagy)。自噬在腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病等多種疾病中發(fā)揮重要作用。
自噬發(fā)生的過(guò)程如下:
圖一 自噬發(fā)生過(guò)程自噬產(chǎn)品介紹:
1.自噬篩選系統(tǒng):
GFP-LC3 WT/MT
GFP-LC3-RFP-LC3 MT
Luciferase LC3 WT/Luciferase LC3 MT
圖二 自噬篩選系統(tǒng)
1.自噬檢測(cè)系統(tǒng):
單熒光LC3病毒
pLenti-CMV-EGFP-LC3-PGK-Puro
pLenti-Ubc-EGFP-3FLAG-LC3
pLenti-EF1a-GFP-LC3-PGK-Puro
雙熒光LC3病毒
AdV-mCherry-GFP-LC3:高效感染
LV-mCherry-GFP-LC3:穩(wěn)定表達(dá)
AAV-mCherry-GFP-LC3:在體檢測(cè)Western Blot檢測(cè)
LC3 I/II、p62:提供LC3、p62抗體檢測(cè)
圖三 自噬檢測(cè)系統(tǒng)
2.自噬基因過(guò)表達(dá)/干擾慢病毒:
干擾慢病毒、3個(gè)靶點(diǎn)/基因、干擾效率70%以上
過(guò)表達(dá)慢病毒、真核表達(dá)載體ORF克隆、對(duì)應(yīng)檢測(cè)抗體圖四 自噬基因操作