服務介紹:
細胞凋亡期間基因組DNA被剪切后可能會形成低分子量的雙鏈DNA片段或者高分子量的單鏈DNA片段,這些受損的DNA片段斷端可通過酶反應修飾核苷酸末端3’-OH被識別。TUNEL反應可將凋亡與壞死及藥物和輻射誘導的DNA鏈斷裂區(qū)分開來。
實驗結(jié)果展示:
實驗過程:
- 經(jīng)過固定及透膜后的細胞用微球菌核酸酶(micrococcal nuclease)或重組DNA酶(Dnaseirecombinant)在15-25℃條件下孵育10 min后再加入TUNEL反應液。
- TUNEL反應液孵育:樣品中加入50 μl新鮮配置的TUNEL反應液后在37℃潮濕環(huán)境中避光孵育60 min,孵育完畢后吸干凈TUNEL反應液棄之,加入PBS輕柔沖洗3次;
- 4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色:加入配置好的DAPI染液于室溫下孵育10 min吸出。PBS沖洗3次后,加入沒過細胞的PBS保濕;
- 觀察和分析:光學顯微鏡下觀察。
樣本運輸要求:
石蠟切片常溫、冰凍切片-20℃、固定后細胞爬片4℃