免疫熒光是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物,再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。在細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素,利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本,熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光(黃綠色或桔紅色),可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位,以及利用定量技術(shù)測(cè)定含量。
小鼠胰腺-免疫熒光(雙標(biāo))
石蠟切片脫蠟至水→抗原修復(fù)→5%羊血清封閉→加一抗→加二抗→DAPI封片→熒光顯微鏡下觀察,照片采集
1.樣本放置于25倍樣本體積的固定液中固定至少24 h(切勿固定時(shí)間過長,切勿冷凍結(jié)冰),常溫運(yùn)輸送樣。
2.石蠟切片常溫運(yùn)輸,冰凍切片-20℃運(yùn)輸。
3、細(xì)胞爬片用固定液浸泡,4℃保存和運(yùn)輸