免疫電鏡檢查(immunoeletron microscopy,IEM)是免疫組織化學(xué)技術(shù)與透射電鏡技術(shù)相結(jié)合,在超微結(jié)構(gòu)水平研究和觀察抗原、抗體結(jié)合定位的一種方法。利用帶有特殊標(biāo)記的抗體與抗原結(jié)合,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物形成一定的電子密度而指示出相應(yīng)抗原所在的部位,能夠?qū)ξ粗乖M(jìn)行早期的診斷。
FA+GA固定→切片→免疫標(biāo)記及染色→透射電鏡觀察→拍照
以下所有樣本必須盡量新鮮,固定液或懸浮液都不得冷凍結(jié)冰!
1. 電鏡檢測取材較為嚴(yán)格,取材需要迅速,材料塊要小,固定液和材料比例為10:1。使用4%多聚甲醛加少量新鮮配制的戊二醛固定,使其終濃度為0.5%~1%。4℃保存或冰浴(條件允許,推薦)運輸至我方。
2. 外秘體囊泡等用緩沖液(如PBS)或者試劑盒中的保存液懸浮,遠(yuǎn)距離-80℃凍存運輸,近距離4℃保存運輸,盡快制片及時電鏡觀察拍照。
注:將所取樣本盡可能固定在生活狀態(tài)下,并保存樣本的抗原活性;免疫電鏡由于GA濃度很低微細(xì)結(jié)構(gòu)變化大,2h或過夜中間換液2~3次。